<h3>Kapalinová chromatografie (HPLC/UHPLC)</h3>
<h3>Ústav chemie potravin a biotechnologií, FCH, VUT v Brně</h3>
<ul>
<li><a href="https://lcms.cz/products/155">Agilent 1260 Infinity HPLC</a></li>
</ul>
Laboratoř Ústavu chemie potravin a biotechnologií (UCHPBT) na Fakultě chemické VUT v Brně byla vybavena kapalinovým chromatografem <a href="https://lcms.cz/library?search=1260&amp;mainauthorItems=10">Agilent 1260 Infinity</a> v rámci projektu „Modernizace areálu VUT v Brně Purkyňova 118“, který byl financován z prostředků EU a státního rozpočtu ČR prostřednictvím Operačního programu Výzkum a vývoj pro inovace (prioritní osa 4). V Laboratoři separačních metod na UCHPBT je komplexně řešena problematika analýzy potravin.
V posledních letech ve spolupráci s Výzkumným a šlechtitelským ústavem ovocnářským Holovousy byla charakterizována řada nových odrůd angreštů, rybízů, černého bezu a jiných netradičních druhů ovoce z hlediska obsahu biologicky aktivních látek. Velký důraz je kladen na analýzu polyfenolických látek a organických kyselin ve vínech a v pivě za účelem sledování autenticity těchto potravin, sledovány jsou metabolity vznikající mikrobiálním zpracováním různých druhů odpadů nebo interakce léčiv s hydrogely. Kapalinový chromatograf Agilent 1260 Infinity díky svým parametrům a také díky dvěma detektorům (DAD a ELSD) rozšířil aplikační možnosti laboratoře a celkově zlepšil výkonnostní ukazatele již zavedených metod v laboratoři.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_doc_Ing_Pavel_Divis_Ph_D_Ustav_chemie_potravin_a_biotechnologii_FCH_VUT_v_Brne_bd5f666129/HPST-doc.-Ing.-Pavel-Divis-Ph.D.-Ustav-chemie-potravin-a-biotechnologii-FCH-VUT-v-Brne.jpg" alt="HPST: doc. Ing. Pavel Diviš, Ph.D. (Ústav chemie potravin a biotechnologií, FCH, VUT v Brně)"/>
<h3>Ústav mléka, tuků a kosmetiky, FPBT, VŠCHT v Praze</h3>
<ul>
<li>Agilent 1260 Infinity Bio-inert HPLC</li>
</ul>
Laboratoř fyzikálně chemické analýzy Ústavu mléka, tuků a kosmetiky, Fakulta potravinářské a biochemické technologie, Vysoká škola chemicko-technologická v Praze, je určena pro analýzu a separace širokého spektra přírodních látek jako tuků, cukrů a bílkovin v rámci studentské vědecko-výzkumné činnosti při řešení diplomových a disertačních prací.
Laboratoř lze rozdělit na tři části.
<ul>
<li>První se zabývá pouze analýzou lipidů pomocí systémů plynové chromatografie (GC) s MS a FID detektory. </li>
<li>Druhá část je určena pro analýzu biomolekul s pomocí vysokoúčinné kapalinové chromatografie (HPLC). </li>
<li>Třetí část se využívá pro preparativní separace bílkovin.</li>
</ul>
V rámce projektu KvaLab bylo v roce 2015 do laboratoře nainstalováno několik nových systémů, jeden z nich je <a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=bio&amp;instrumentationItems=27">biokompatibilní HPLC Agilent Infinity 1260</a>. Tento systém umožňuje využití klasických HPLC metod jako RP-HPLC a také separace s pomocí bio SEC kolon a mobilních fází se zvýšenou koncentrací solí. Kromě toho dává kvaternární pumpa a <a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=Buffer%20Advisor%20Software&amp;instrumentationItems=27">Buffer Advisor Software</a> možnost automatického míchání pufrů pro provedení rychlého screeningu na anion výměnných kolonách. 
Automatický sběrač frakcí a přepínač kolon při takovém screeningu dovoluje udělat následnou rychlou analýzu odebraných frakcí pouze přesunutím držáku se vzorky do autosampleru a jednoduchým přepnutím kolony. 
Pokud je třeba analyzovat vzorky sacharidů nebo triglyceridy, efektivním doplňkem k takovému systému je detektor <a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=ELSD%201290&amp;instrumentationItems=27">1290 Infinity II ELSD</a>. Díky této multifunkční sestavě je laboratoř schopna pokrýt širokou škálu potřeb laboratoře.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Ing_Jan_Kovar_HPST_Mgr_Volodymyr_Skalka_M_Sc_Ustav_mleka_tuku_a_kosmetiky_FPBT_VSCHT_v_Praze_63ff9dad44/HPST-Ing.-Jan-Kovar-(HPST)-Mgr.-Volodymyr-Skalka-MSc.-Ustav-mleka-tuku-a-kosmetiky-FPBT-VSCHT-v-Praze.jpg" alt="HPST: Ing. Jan Kovář (HPST), Mgr. Volodymyr Skalka, MSc. (Ústav mléka, tuků a kosmetiky, FPBT, VŠCHT v Praze)"/>
<h3>Ústav chemie a biochemie, AF, Mendelova Univerzita v Brně</h3>
<ul>
<li><a href="https://lcms.cz/products/157">Agilent 1260 Infinity Analytical SFC</a></li>
</ul>
Laboratoř Metabolomiky sekundárních metabolitů, Ústav chemie a biochemie, CEITEC Mendelova univerzita v Brně, je zaměřena na studium sekundárních metabolitů.
Hlavní část výzkumu je věnována především vývoji nových separačních metod. Laboratoř disponuje moderními extrakčními technikami jako jsou SFE, PLE, MAE. Část výzkumu je věnována kombinovaným technikám SFE/SPE a PLE/SPE. 
Hlavní část výzkumu je směřována do identifikace a kvantifikace sekundárních metabolitů napříč rostlinnou říší. Pro tuto část výzkumu disponuje laboratoř hmotnostní spektrometrií (HRMS, QQQ) doplněnou o ambientní techniky (DART, DESI, AP MALDI). Chromatografická část disponuje systémy rychlé (RRLC), ultra (UHPLC) a 2D chromatografie.
V loňské roce byla laboratoř doplněna o superkritickou fluidní chromatografii <a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;instrumentationItems=38">Agilent 1260 Infinity SFC</a>. V současné době je SFC využívána pro monitoring karotenoidních barviv v řasách. V následujícím období se laboratoř zaměří na separaci vybraných stereoizomerů ve vyšších rostlinách. Superkritická fluidní chromatografie byla instalována začátkem roku 2015 a je využívána pro monitoring vybraných sekundárních metabolitů v rostlinné říši.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Ing_Aneta_Strejckova_prof_RN_Dr_Borivoj_Klejdus_Ph_D_Ing_Jan_Kovar_HPST_Ing_Romana_Bacova_Ustav_chemie_a_biochemie_AF_Mendelova_Univerzita_v_Brne_30a5fbe9a7/HPST-Ing.-Aneta-Strejckova-prof.-RNDr.-Borivoj-Klejdus-Ph.D.-Ing.-Jan-Kovar-(HPST)-Ing.-Romana-Bacova-Ustav-chemie-a-biochemie-AF-Mendelova-Univerzita-v-Brne.jpg" alt="HPST: Ing. Aneta Strejčková; prof. RNDr. Bořivoj Klejdus, Ph.D.; Ing. Jan Kovář (HPST); Ing. Romana Bačová (Ústav chemie a biochemie, AF, Mendelova Univerzita v Brně)"/>
<h3>Ústav konzervace potravin, FPBT, VŠCHT v Praze</h3>
<ul>
<li><a href="https://lcms.cz/products/155">Agilent 1260 Infinity HPLC</a></li>
</ul>
Ústav konzervace potravin, Fakulta potravinářské a biochemické technologie, Vysoká škola chemicko-technologická v Praze, se zabývá hlavně problematikou potravin, a to vybranými potravinářskými technologiemi (ovoce, zelenina, maso, vejce, lahůdky aj.), balením potravin, kvalitou a autenticitou potravin, určením doby trvanlivosti výrobků, systémy jakosti v oblasti potravinářství apod. V rámci ústavu působí i nezávislá obalová laboratoř, která zkoumá vlastnosti obalových materiálů, hodnotí jejich zdravotní nezávadnost, provádí celkové i speciální migrační testy aj. 
Významnou aktivitou je pedagogická činnost včetně vedení bakalářských, diplomových a disertačních prací. Ústav konzervace potravin tak vychovává specialisty pro potravinářské závody, kontrolní laboratoře, státní správu, kontrolní orgány apod. Vědecká činnost ústavu je zaměřena zejména na aplikovaný výzkum v oblasti potravinářství. 
Ústav konzervace potravin poskytuje servisní služby v oblasti poradenství, technologických zkoušek, vývoji nových výrobků, zjišťování příčin defektů apod. V neposlední řadě jsou jako servis, zejména pro výrobce potravin, zajišťovány i akreditované analytické a mikrobiologické rozbory.
Kapalinová chromatografie je v laboratořích Ústavu konzervace potravin používána pro akreditované i neakreditované rozbory vybraných složek potravin a kontaminantů. Na přístrojích jsou řešeny vědecké úkoly ústavu včetně bakalářských diplomových a disertačních prací. Mezi vybrané rozbory lze zmínit: konzervanty, organické kyseliny, sacharidy, 5-HMF, floridzin, kofein, theobromin, morfin atd.
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_doc_Ing_Ales_Rajchl_Ph_D_Ustav_konzervace_potravin_FPBT_VSCHT_v_Praze_8090fbe91f/HPST-doc.-Ing.-Ales-Rajchl-Ph.D.-Ustav-konzervace-potravin-FPBT-VSCHT-v-Praze.jpg" alt="HPST: prof. Ing. Aleš Rajchl, Ph.D. (Ústav konzervace potravin, FPBT, VŠCHT v Praze)"/>

Zpátky do minulosti: HPLC systémy Agilent Technologies u našich zákazníků

Pro separaci se využívá distribuce látek mezi dvě fáze, mobilní/pohyblivou a stacionární/nepohyblivou.
<h5>Z hlediska fyzikálně-chemického principu dělení můžeme kapalinovu chromatografii rozdělit na:</h5>
<ul>
<li>adsorpční chromatografii - k separaci dochází v důsledku specifických interakcí látek se stacionární fází tvořenou pevnými, nemodifikovanými částicemi</li>
<li>rozdělovací chromatografii - látky jsou zachytávány v kapalné stacionární fázi, která je nanesená na pevném nosiči</li>
<li><a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=ion+exchange">iontově-výměnnou chromatografii</a> - slouží k separaci iontů na stacionární fázi, kterým je nosič s navázanými nabitými funkčními skupinami</li>
<li><a href="https://lcms.cz/library?instrumentationItems=42&amp;mainauthorItems=10&amp;search=GPC">gelovou (permeační) chromatografii</a> - kdy dochází k dělení látek na základě velikosti částic, které se zachytávájí ve stacionární fázi tvořené gelem s jasně definovanou velikostí pórů</li>
<li><a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=affinity+chromatography">afinitní chromatografii</a> – která umožňuje oddělení příbuzných proteinů z komplexní směsi, na základě interakce s nosičem s imobilizovanými ligandy</li>
<li>speciální chromatografie – <a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=chiral">chirální</a> aj.</li>
</ul>
<blockquote>
<h4>+ 20 zdarma dostupných webinářů Agilent Technologies na téma <a href="https://lcms.cz/webinars?search=agilent&amp;tags=36-24">akademie a principy HPLC</a> v databázi</h4>
</blockquote>
<blockquote>
<h5>School Series of LC Basic Chapter</h5>
</blockquote>
<blockquote>
<ul>
<li>Pochopení nuancí HPLC kolon</li>
<li><a href="https://lcms.cz/library?instrumentationItems=34&amp;mainauthorItems=10&amp;search=selection">Výběr správné chemie kolony</a></li>
<li>Pochopení dopadu stacionární fáze kolony na selektivitu</li>
<li>Jak zvýšit produktivitu vaší laboratoře</li>
<li>Základní <a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=fundamentals">teorie a principy HPLC chromatografů</a></li>
<li>Typy hardwaru (čerpadla, autosamplery, termostaty kolon a detektory)</li>
<li><a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=troubleshooting">Tipy a triky pro odstraňování problémů</a> souvisejících s hardwarem</li>
</ul>
</blockquote>
<blockquote>
<h5>School Series of LC Advanced Chapter</h5>
</blockquote>
<blockquote>
<ul>
<li>Současné <a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=method+developement">trendy ve vývoji HPLC metod</a></li>
<li>Systematické přístupy</li>
<li>Jak začít s vývojem HPLC metody</li>
<li>Služby pro celou laboratoř</li>
<li>Pokročilé tipy a triky pro odstraňování problémů</li>
<li>Vliv parametrů pokročilých metod v HPLC</li>
<li>Klíčové unikátní vlastnosti UHPLC systémů</li>
</ul>
</blockquote>
<h5>Obecně se kapalinový chromatograf skládá z:</h5>
<ul>
<li>vysokotlakého čerpadla (pumpy) – slouží k transportu mobilní fáze</li>
<li>zařízení pro dávkování vzorku – automatické nebo manuální</li>
<li>chromatografické kolony (stacionární fáze) – ta může být v termostatovaném prostoru</li>
<li>detektoru - zaznamenává signál, který je dán rozdílem mezi průchodem čisté mobilní fáze a mobilní fází obsahující eluovanou složku (vzorek)</li>
<li>také může obsahovat řadu obměn – další detektor i pumpu, frakční kolektor, soustavu ventilů apod.</li>
</ul>
Smyslem tohoto článku je pak vysvětlit tok mobilní fáze systémem HPLC na jedné z nejčastěji používaných sestav Agilent Technologies. 
Na Obrázku 1 můžete vidět schéma, kde mobilní fáze prochází kvartérní pumpou, jejíž součástí je degasser pro její odplynění a která umožňuje míchání až čtyř různých rozpouštědel. K tomuto nízkotlakému míchání dochází ve směšovacím ventilu (<a href="https://lcms.cz/library?mainauthorItems=10&amp;search=MCGV">MCGV</a> - multi channel gradient valve), následně pak mobilní fáze proudí do vstupního ventilu před prvním pístem pumpy.
Tento ventil může být řízen elektronicky (AIV - active inlet valve) a nebo pohybem pístu (PIV – passive inlet valve). Prvním pístem je pak mobilní fáze tlačena do výstupního ventilu (outlet valve) a na tlumič rázů (damper), jehož součástí je i tlakový senzor. Přes druhý píst proudí mobilní fáze do promývacího ventilu (purge valve), který ji pouští buď do odpadu a promývá se pouze pumpa a nebo dál do zbytku sestavy. 
<img src="https://storage.googleapis.com/labrulez-bucket-strapi-h3hsga3/HPST_Obrazek_1_Schema_toku_mobilni_faze_kapalinovym_chromatografem_s_UV_detekci_f7d6bf31a4/HPST-Obrazek-1-Schema-toku-mobilni-faze-kapalinovym-chromatografem-s-UV-detekci.jpg" alt="HPST: Obrázek 1 Schéma toku mobilní fáze kapalinovým chromatografem s UV detekcí"/>
Pokud je promývací ventil zavřený, jde mobilní fáze kapilárou do dávkovacího ventilu autosampleru. Nedochází-li v dané chvíli k nástřiku vzorku, proudí tato fáze skrz dávkovací zařízení, smyčku, jehlu a sedýlko zpět do dávkovacího ventilu. To je hlavní výhoda automatických samplerů firmy Agilent Technologies, že vnitřní části, potřebné pro nadávkování vzorku, jsou neustále promývány mobilní fází a tím se snižuje možnost přenosu analytů z jednoho vzorku do druhého. 
Z autosampleru proudí mobilní fáze na chromatografickou kolonu, kde po nadávkování vzorku dochází k separaci jednotlivých složek vzorku, které jsou dále unášeny do detektoru diodového pole (DAD). 
Detekce těchto složek v DAD je pak dána absorbancí paprsku světla konkrétní vlnové délky při průchodu analytickou celou, kterou také prochází mobilní fáze.
V <a href="https://lcms.cz/products?category=8&amp;distributorItems=37&amp;manufacturerItems=10">chromatografickém softwaru</a> pak můžeme rozdíl mezi absorbancí čisté mobilní fáze a absorbancí mobilní fáze s odseparovanou složkou vzorku pozorovat jako chromatogram. Z cely detektoru odchází mobilní fáze do odpadu, případně do frakčního kolektoru či dalšího detektoru.
Správné pochopení toku mobilní fáze pak může uživatelům usnadnit diagnostiku problému, který se může projevit nestandardněm vysokým nebo naopak nízkým zpětným tlakem v HPLC systému. Tento tlak je kontinuálně monitorován tlakovým senzorem a může být sledován v chromatografickém softwaru.
Příští díl servisního okénka HPLC by měl být věnován jednotlivým typům HPLC/UHPLC pump, které na náš trh dodává společnost Agilent Technologies.
<h3>Přehled literatury k základům a principům v kapalinové chromatografii od Agilent Technologies (<a href="https://lcms.cz/library?search=fundamentals&amp;mainauthorItems=10">ke stažení v knihovně LabRulezLCMS</a>)</h3>
<ul>
<li>HPLC Separation Fundamentals - LC Columns and Consumables (Prezentace | 2007)
</li>
<li>HPLC Troubleshooting Fundamentals (Prezentace | 2021)
</li>
<li>Mass Spectrometry Fundamentals –Theory (Prezentace | 2016)
</li>
<li>SAMPLE PREPARATION FUNDAMENTALS FOR CHROMATOGRAPHY (Příručky | 2013)
</li>
<li>Eliminate your Application and Chromatography Challenges - Optimizing your Application/Method Transfer considerations (Prezentace | 2020)
</li>
<li>Eliminate your Application and Chromatography Challenges - Troubleshooting your Method, Application/Chromatography (Prezentace | 2020)
</li>
<li>Is 2D HPLC the Answer for You (Prezentace | 2021)
</li>
<li>Demystifying the Chromatographic Process (Prezentace | 2014)
</li>
<li>HPLC Method Development Systematic Approach vs Random Walk - Improving the Efficiency of Method Development and Optimization (Prezentace | 2014)
</li>
<li>Can I Really Enjoy the Benefits of the Latest LC Column Technology? (Prezentace | 2016)
</li>
</ul>

TEORIE, PRAXE A ÚDRŽBA: HPLC – Vysokoúčinná kapalinová chromatografie – základy a principy

Webináře

Aplikace

Akademie

Osobnosti

Plasty

Životní prostředí

Potraviny

Vody

Zdraví

Přednáška

Vědecký článek

Rozhovor

Toxikologie

Popularizace

Věda a výzkum

Software

Covid-19

Kariéra

Článek

Laboratoře

Různé

Produkt

Video

Poster

Nejbližší akce

Typ novinky

Zaměření

Je autorizovaným distributorem společnosti Agilent Technologies pro Českou republiku v oblastech chromatografie (GC, HPLC, UHPLC, kapilární elektroforéza) a hmotnostní spektrometrie (GC/MS, LC/MS, CE/MS), disolučních aparátů, molekulární (UV-Vis, UV-Vis-NIR, fluorescence, FTIR analyzátory a mikroskopy) a atomové spektroskopie (ICP-OES, ICP-MS, AAS), a v neposlední řadě také v oblasti molekulární biologie a genomiky (analýza nukleových kyselin a proteinů, microarray skenery a skla, PCR & RT-PCR, qPCR, řešení pro NGS, reagencie pro mutagenezi a klonování, sondy FISH a další).

Altium International

19th Czech - Slovak Spectroscopic Conference (CSSC) & Mössbauer Spectroscopy in Material Science (MSMS)

Zpátky do minulosti: HPLC systémy Agilent Technologies u našich zákazníků

TEORIE, PRAXE A ÚDRŽBA: HPLC – Vysokoúčinná kapalinová chromatografie – základy a principy

Nejbližší akce

19th Czech - Slovak Spectroscopic Conference (CSSC) & Mössbauer Spectroscopy in Material Science (MSMS)

Altium Multi-Omics Solutions Day at CEITEC

Waters Softwarové školení Empower Basic

Webináře

TechTalk: Benefits of high-resolution ICP-OES for challenging applications

LC-MS/MS Analysis of Nitrosamines using novus V55

GLP-1 & GIP under the lens: HRMS strategies for synthetic peptide profiling